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發(fā)布日期:2022-05-30 點(diǎn)擊率:42
高效毛細(xì)管電泳色譜儀(CE)是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,利用荷電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離。由于CE溶質(zhì)區(qū)帶的超小體積特性導(dǎo)致光程太短,圓柱形毛細(xì)管作為光學(xué)表面不夠理想,對(duì)檢測(cè)器靈敏度要求相當(dāng)高。CE常用檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器和電化學(xué)檢測(cè)器等。
一、紫外檢測(cè)器:
紫外檢測(cè)器是基于物質(zhì)對(duì)紫外吸收進(jìn)行檢測(cè),是成熟的檢測(cè)器,在CE中應(yīng)用廣。
1、原理:
入射紫外光通過樣品時(shí),被吸收的多少符合朗伯-比耳定律。
檢測(cè)點(diǎn)在毛細(xì)管的末端,檢測(cè)點(diǎn)的毛細(xì)管的外涂層要燒掉。
2、檢測(cè)方法:
(1)固定波長:
光源為低紫外氘燈,用濾光片獲得固定波長的光。
(2)可變波長:
光源為氘燈或鎢燈,用單色器(棱鏡或光柵)獲得連續(xù)可調(diào)波長的光。
(3)快速掃描:
1)利用線性二極管陣列快速捕獲紫外光。
2)利用硅光電倍增管作快速掃描。
3、特點(diǎn):
(1)通用性好,特別是對(duì)蛋白質(zhì)的適用性很強(qiáng)。
(2)靈敏度不足。
4、提高靈敏度的方法:
由于CE檢測(cè)池的光路長度為毛細(xì)管內(nèi)徑,一般不超過100μm,小內(nèi)徑的毛細(xì)管限制了紫外檢測(cè)器的靈敏度,可采用以下幾種方法來提高靈敏度。
(1)優(yōu)化測(cè)定波長:
通過測(cè)定不同波長下的信噪比來選擇測(cè)定波長,以提高靈敏度。
(2)減少檢測(cè)噪音:
1)提高光源強(qiáng)度。
2)采用聚焦和狹縫等減少背景光的影響。
3)采用良好的信號(hào)放大系統(tǒng)。
(3)擴(kuò)展吸光光路長度:
1)為了克服圓柱形毛細(xì)管表面引起的散射、失真等不利的光學(xué)特性和增加光路長度,可采用矩形、扁形、Z形和泡型等特殊毛細(xì)管。當(dāng)然柱效會(huì)有所下降。
2)對(duì)于普通毛細(xì)管,可采用軸向照射和多次反射來增加光路長度。
①軸向照射:將激光光束從毛細(xì)管末端沿管軸方向入射,在毛細(xì)管側(cè)面進(jìn)行檢測(cè)。
②多次反射:在毛細(xì)管壁鍍上銀,分別開入射窗和出射窗。當(dāng)入射光以特定角度入射后,在毛細(xì)管內(nèi)反射30~40次后從出射窗口射出。
二、激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器:
激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器采用激發(fā)光源使檢測(cè)物質(zhì)產(chǎn)生熒光進(jìn)行檢測(cè)。
檢測(cè)下限為10ˉ12~10ˉ10mol/L。
三、質(zhì)譜檢測(cè)器:
在CE-MS聯(lián)用中,毛細(xì)管區(qū)帶電泳為常用。電子噴霧離子源可檢測(cè)多種高質(zhì)量的帶電分子,從CE分離出來的分子經(jīng)過接口后直接進(jìn)入MS,是MS的離子源。
檢測(cè)下限為10ˉ9~10ˉ7mol/L,通用性好,可獲得溶質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息,但接口復(fù)雜。
四、電化學(xué)檢測(cè)器:
電化學(xué)檢測(cè)器可避免光學(xué)類檢測(cè)器遇到的光程太短的問題,是CE中靈敏的檢測(cè)器之一。
1、電導(dǎo)檢測(cè)器:
柱上電導(dǎo)檢測(cè)是在毛細(xì)管壁上用激光鉆兩個(gè)孔,插上兩根鉑電極,再將孔封住進(jìn)行檢測(cè)。
檢測(cè)下限為10ˉ7~10ˉ5mol/L,通用性好,但需專門裝置和毛細(xì)管處理。
2、安培檢測(cè)器:
CE中微量樣品可使庫侖效率大大提高,可達(dá)40%以上,而在HPLC中很少超過10%。
檢測(cè)下限為10ˉ9~10ˉ8mol/L,靈敏度高,選擇性好,但僅適用于電活性物質(zhì)的檢測(cè)。
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