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熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。

　　熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機和無機化學(xué)等領(lǐng)域。

工作原理

物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)， 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光。

　　不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同，其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質(zhì)的鑒定。

　　在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時，其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系，即IF=KC，利用這種關(guān)系可以進行熒光物質(zhì)的定量分析，與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行。

　　1． 熒光發(fā)射光譜

　　選擇某一固定波長的光激發(fā)樣品，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。

　　2． 熒光激發(fā)光譜

　　選定某一熒光發(fā)射波長記錄熒光發(fā)射強度作為激發(fā)光波長的函數(shù)，即得熒光激發(fā)光譜。

　　3．時間分辨技術(shù)；

　　可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進行分辨并分別測量。

　　時間分辨熒光測定公式如下：

　　P(t) = P₀EXP (-t/τ)

　　式中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)

　　P₀：強度取值

　　EXP：指數(shù)運算符

　　t：時間取值

　　τ：熒光平均時間壽命